基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證分析雞血藤治療卵巢癌的分子機(jī)制

中國(guó)中藥雜志

第47卷第3期

通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接及體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn),對(duì)雞血藤Spatholobi Caulis 治療卵巢癌(ovarian cancer,OC)的主要活性成分及其潛在的作用機(jī)制進(jìn)行探討。運(yùn)用中藥藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)(TCMSP)獲取雞血藤的主要活性成分及其預(yù)測(cè)靶點(diǎn),通過(guò)GeneCards、OMIM、PharmGkb、TTD、DrugBank 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索獲得疾病基因。將疾病及藥物預(yù)測(cè)靶點(diǎn)進(jìn)行交集處理,篩選出共同的潛在治療靶點(diǎn)。運(yùn)用Cytoscape 3. 7. 1 軟件構(gòu)建“藥物-成分-疾病-靶點(diǎn)”相互作用網(wǎng)絡(luò)圖;運(yùn)用STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建蛋白相互作用的PPI 網(wǎng)絡(luò)。運(yùn)用R 4. 0. 5 進(jìn)行GO 與KEGG 功能富集分析。分析對(duì)接虛擬篩選的處理和優(yōu)化由Schr?dingerMaestro 軟件完成。該研究篩選出雞血藤23 個(gè)活性成分,涉及75 個(gè)卵巢癌靶點(diǎn)及178 個(gè)相關(guān)信號(hào)通路;網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果表明雞血藤可能通過(guò)作用于GSK-3β、Bcl-2、Bax 等關(guān)鍵靶點(diǎn),發(fā)揮抗卵巢癌作用;分子對(duì)接結(jié)果顯示GSK-3β 與活性成分櫻黃素結(jié)合活性較好。最后體外實(shí)驗(yàn)將篩選出的雞血藤活性成分櫻黃素對(duì)人卵巢癌細(xì)胞SKOV3 進(jìn)行核心靶點(diǎn)和通路的初步驗(yàn)證。采用CCK-8 法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)櫻黃素對(duì)人卵巢癌細(xì)胞SKOV3 凋亡的影響。運(yùn)用Western blot 法檢測(cè)櫻黃素靶點(diǎn)及相關(guān)調(diào)控蛋白的表達(dá)。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明,櫻黃素對(duì)卵巢癌細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用,并且櫻黃素對(duì)SKOV3 有誘導(dǎo)凋亡的作用。Western blot 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,櫻黃素可以通過(guò)抑制GSK-3β 磷酸化的發(fā)生,調(diào)控下游Bcl-2、Bax 蛋白的表達(dá),誘導(dǎo)SKOV3 細(xì)胞凋亡的發(fā)生。該研究揭示了網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)并指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的科學(xué)性,證實(shí)櫻黃素可通過(guò)阻斷GSK-3β / Bcl-2/ Bax 細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路治療卵巢癌,為雞血藤治療卵巢癌的機(jī)制研究提供依據(jù)。